分光光度計的性能檢查
(1)波長校正：在更換光源燈、重新安裝、運輸或檢修后，或儀器不能正常工作時，使用光電比色計或分光光度計進行波長校正。對于正常工作的儀器，應(yīng)每隔一個月檢查一次波長，必要時應(yīng)進行校準，以確保波長讀數(shù)與通過樣品的波長和儀器的靈敏度一致。方法 常用的光譜釹濾光片校準法適用于721儀器可見光區(qū)的波長校準。通常以 585nm 或 529nm 處的吸收峰或 T% 作為標準。鑒于721儀器的發(fā)射光波長較寬，573nm和585nm兩個峰谷不容易分離，校準時容易出現(xiàn)誤差。因此，建議使用 529nm 處的峰值或谷值作為波長校準的標準。校準時，根據(jù)需要預(yù)熱儀器。要求電源電壓穩(wěn)定。將波長板設(shè)置在580nm，將T%調(diào)到，在比色皿上放一張白紙，觀察是否有光強均勻的光斑，邊緣無光暈或雜散光。如果不符合要求，調(diào)整燈泡位置使之符合要求是對波長校正的粗調(diào)。然后將靈敏度設(shè)置為“1"（zui低檔），將波長刻度盤對準529nm，儀表機械零位為零，光路空白時將T%調(diào)整為100%T，檢查零點和100%T 反復(fù)穩(wěn)定。將釹光譜濾光片插入光路中，緩慢旋轉(zhuǎn)波長盤，找到透光率zui低的點（左右旋轉(zhuǎn)波長盤時，該點的透光率值增加），這點是波長529nm。檢查波長盤的指示值是否為529nm，如果指示值為534nm，此時波長誤差為5nm，如果超出規(guī)格（±1nm）必須調(diào)整。
調(diào)整方法：將波長盤對準529nm，從光路中取出光譜釹濾光片，在光路空白時將儀表指針調(diào)至100%T，然后將光譜釹濾光片插入光路。打開儀器左側(cè)的小蓋，找到波長校正螺絲（三個中與左手柄長度相同的那個）；逆時針方向調(diào)整（負誤差為順時針方向），使儀表指針的T%zui低。反復(fù)檢查波長誤差，直到符合儀器的技術(shù)指標。合上左邊的小蓋，校準結(jié)束。
一些gao端儀器如島津UV-260雙光束分光光度計可以在測量比色池中使用氫燈或光譜釹濾光片。對濾光片掃描程序進行編程后，儀器可在一定波長范圍內(nèi)自動進行波長校正。gao端分光光度計的光學系統(tǒng)密封在一個單元組件中。如果出現(xiàn)故障，波長不準，往往需要請廠家派人維修。還有其他方法如譜線校正法、干涉濾光片校正法和有色溶液校正法等，請參考相關(guān)資料。
(2)線性檢查：線性檢查包括儀器線性和測量方法線性的檢查。線性誤差表現(xiàn)為溶液濃度與吸光度的非線性關(guān)系，存在正偏差或負偏差現(xiàn)象。這種偏差，根據(jù)比爾定律，來自兩個方面：一是溶液本身不符合比爾定律，這種現(xiàn)象稱為化學偏差；另一種是儀器本身的各種因素的影響，使得吸光度測量值與濃度的關(guān)系不是線性的，這種現(xiàn)象稱為儀器偏差。這里研究后者。儀器偏差的因素很多，如雜散光、有限帶寬、檢測器噪聲、環(huán)境條件變化、波長變化、比色皿誤差、輻射的非平行性以及檢測器本身的非線性等。
儀器的線性檢查常使用已知在一定波長和一定濃度范圍內(nèi)服從比爾定律的有色物質(zhì)，并與不同濃度的溶液混合，檢查儀器本身是否能如實反映樣品的濃度變化。有色物質(zhì)。該檢驗方法與被測物質(zhì)的顏色反應(yīng)等任何方法學問題無關(guān)。根據(jù)濃度繪制測量的吸光度，理想情況下應(yīng)該是一條直線。常用的方法是使用0.8、1.6、2.4、4.0 mg/L Evan Blue濃度系列進行檢查，波長為610nm。
(3)雜散光(散光)檢測：在吸光度測量中，檢測器感覺到的所有不需要的輻射稱為雜散光。雜散光對吸光度測量的準確性有嚴重影響，但往往被忽視。雜散光的來源包括： ①儀器本身的原因，如單色器的設(shè)計、光源的光譜分布、光學原件的老化程度、帶寬、儀器內(nèi)部的反射和散射; ②室內(nèi)光線過強漏光 儀器與儀器暗室蓋板不嚴密； ③樣品本身的原因，如樣品是否有熒光，樣品的散射能力等。
雜散光檢測法： ① 10±0.1g/L碘化鈉溶液可用于紫外區(qū)雜散光監(jiān)測，240nm處測吸光度應(yīng)大于2.00。另外，也可用12g/Llu化鉀溶液測220nm處的透光率，即雜散光量，一般應(yīng)小于1%T。以上所有測定均使用石英杯進行，并用蒸餾水調(diào)零。 ②在可見光區(qū)可用光譜釹過濾器或硫酸鎳法檢查。先用光譜釹濾光片校準波長，然后用黑紙擋住比色皿的光路（進口儀器有比色皿狀的黑柱），然后調(diào)到0%T，再用空氣使空白調(diào)整到 100%T。插入光譜釹濾光片，在585nm處測量，測量值為雜散光級。
(4)比色皿的質(zhì)量檢驗：比色皿一般由玻璃、石英或螢石制成，光徑為1.0或0.5cm。光線通過時，一部分光線因空氣與玻璃接觸面的反射而損失（4%），另一部分（很少）被玻璃吸收。除了比色杯的質(zhì)量，玻璃的厚度均勻，頂部和底部相同，杯子相互匹配。廠家一般供應(yīng)四件套，杯口上部外側(cè)有一個箭頭，箭頭用在光源一側(cè)。盡管如此，在使用前應(yīng)進行質(zhì)量檢查。常用伊文藍法：將一定量的2.0mg/L伊文藍溶液倒入比色皿中，比色皿內(nèi)液面應(yīng)相等。以比色皿為標準，使用紅色濾光片（波長600-610nm），用水校零后將這個杯子的讀數(shù)調(diào)整到50%T，然后讀取剩余杯子的透光率。透光率差在±0.5%T以內(nèi)者為合格。
(5)穩(wěn)定性檢驗：檢驗方法：將分光光度計及附件接0.5kVA以上可調(diào)變壓器，先調(diào)電壓220V，波長固定在650nm，在光路比色杯中裝空白液調(diào)節(jié)時讀數(shù)為90%T，將電壓升到230V再降到190V，觀察透光率的漂移值。如果在88.5%～91.5%T之間，則為合格。在電源電壓恒定的情況下，3分鐘內(nèi)讀數(shù)漂移不應(yīng)超過刻度上限的±0.5%。
(6) 重復(fù)性檢驗：在波長、工作狀態(tài)、電源電壓、比色皿匹配等合格的前提下進行重復(fù)檢驗。當由交流電源供電時，儀器重復(fù)測量的溶液讀數(shù)之間的差異應(yīng)小于或等于刻度上限的 1%。測試方法：在120-150攝氏度下干燥分析純二絡(luò)合鉀2小時，并在干燥器中冷卻。稱取509.1mg于1000ml容量瓶中，用蒸餾水溶解并加至刻度，混勻（此溶液為180mg/L鉻）。所用溶液為 30、60、180 毫克鉻/升。取波長440nm，連續(xù)測量每個應(yīng)用溶液的濃度管3-5次，濃度管中的一個誤差小于1%T為合格。
(7)靈敏度檢查：將重鉻酸鉀溶液配制成30和32.5mg鉻/L和120和122.5mg/L鉻4個應(yīng)用溶液(兩組鉻濃度差為2.5mg/L)。波長為440nm，用水調(diào)零點，連續(xù)測定上述應(yīng)用溶液的吸光度3次，兩組2.5mg/L鉻濃度差的吸光度差不小于0.01為合格
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